Пцр результаты норма

Содержание
  1. Норма пцр
  2. Определение вируса гепатита С
  3. Виды анализа на гепатит С
  4. Результаты количественного анализа
  5. Что такое ПЦР?
  6. Виды метода ПЦР
  7. Особенности количественного ПЦР анализа
  8. Показания
  9. Для чего проводится на различных этапах течения болезни?
  10. Расшифровка
  11. Норма количественного анализа на гепатит С
  12. Отклонения
  13. Плюсы метода
  14. Количественная ПЦР: суть анализа и расшифровка результатов
  15. Описание
  16. Суть анализа
  17. Способ проведения
  18. Виды ПЦР
  19. Сдача на ПЦР биоматериала
  20. Количественная оценка полученных результатов
  21. Что обнаруживается?
  22. Особенности
  23. Стоимость ПЦР-диагностики
  24. Эффективность метода ПЦР: диагностика инфекций
  25. ПЦР исследование: основные преимущества
  26. Особенности метода ПЦР:
  27. Результаты анализа ПЦР
  28. Результаты диагностики ПЦР
  29. ПЦР расшифровка: результаты
  30. результаты ПЦР исследований | ВМТ
  31. Подготовка материала – выделение РНК
  32. Что можно измерить с помощью ПЦР в реальном времени?
  33. Словарь терминов:
  34. Общее качество данных

Норма пцр

Пцр результаты норма

Вирус гепатита С способен размножаться в клетках крови и вызывать лимфопролиферативные болезни. Благодаря множественным мутациям иммунная защита организма ослабевает, возникают генотипы и субтипы вируса.

При правильном и своевременном определении конкретного вида зависит эффективность противовирусной терапии. Опасность инфицирования состоит в том, что болезнь протекает бессимптомно.

Всего в 15 процентах из 100 могут наблюдаться тошнота и рвота, похудением и повышением температуры.

Определение вируса гепатита С

Стандартная норма гепатита С – это размеры от 40 до 60 нм, с большинством липидов, поражение печени в результате острого или хронического течения болезни.

Гепатит С, а именно РНК-вирус семейства Togaviridae, крайне стойкий, передается путем переливания крови или использования нестерильных предметов, неправильная гигиена ванных принадлежностей и др.

Количественный анализ позволяет исследовать кровь и выявить генетическую структуру инфицируемого вируса.

Чтобы гепатит С и его генотипы были определены, проводят количественный анализ. В зависимости от анализатора могут определить три уровня заболеваемости РНК-вирусом.

Субтипы могут производить различные модификации, поэтому специфика и чувствительность анализатора должна быть на сто процентов. Помимо обнаружения болезни у пациента, необходимо определить степень его тяжести. Некоторые лаборатории не имеют полностью всех данных по расшифровкам РНК-вируса, есть вероятность ложноположительного ответа.

Исследование на гепатит С будет точнее при изучении таких показателей:

АлАТ, АсАТ; ЩФ; ЛДГ.

Обратив внимание на результаты этих показателей и общее состояние организма, выводится результат, показывающий степень зараженности, форму, а также количество клеток гепатита С в крови. Это способствует процессу выздоровления и эффективности противовирусной терапии.

Виды анализа на гепатит С

Полиразмерная цепная реакция (ПЦР) дает представление о количестве частиц ДНК во взятых у пациента анализах, при этом правильно определит возбудителя инфекции.

Могут проявиться возбудители инфекционных заболеваний. Такое инфекционное заболевание печени, как гепатит С, в наше время поддается лечению, когда его своевременно обнаруживают. При подозрении на наличие вируса делают ПЦР анализ.

При том, что длительное время симптомы вируса могут маскироваться, человек может не ощущать начала течения болезни.

Но при тщательном обследовании в 60–70% случаев выявляется гепатит С, первоочередный анализ, при котором – это ИФА, затем следует ПЦР диагностика.

Анализ проводится в определенные периоды, чтобы определить стадию заболевания и назначить соответствующее лечение. Обойтись без этого, не применяя все эти процедуры, можно, прививаясь от гепатита.

Анализ, включающий ПЦР-диагностику, предоставляет картину болезни, то, насколько активен вирус в разные периоды развития.

Сначала идет качественный анализ, который лишь подтверждает гипотезу насчет инфицирования, а затем количественный, определяющий нагрузку на печень. Идеальным вариантом будет отрицательный результат на гепатит С в генетическом материале пациента.

Качественный и количественный анализ

Различают анализ качественный и количественный. Суть первого в том, что он определяет присутствие инфекции в крови. А это значит вирус поражает здоровые клетки печени. При обнаружении у больного антител к гепатиту С сразу проводят качественный тест.

Норма, которую должен выдать результат – это «в крови не обнаружено». При определении концентрации вируса есть необходимость в знании чувствительности диагностической системы, так как анализ могут делать люди, проходящие противовирусную терапию.

Степень чувствительности анализатора не должна быть менее 50 МЕ/мл.

При обнаружении вируса делают количественный анализ, другими словами, вирусную нагрузку, определяющую концентрацию вируса в крови и тяжесть заболевания.

Вирусная РНК, находящаяся в определенном количестве крови, определяется как норма из расчета 1 мл на 1 сантиметр кубический. После количественного определения вирусной нагрузки можно судить о степени заражения еще неинфицированного окружения. Как только концентрация гепатита С повышается в крови, от окружения нужно изолироваться.

Важно на первых этапах обнаружить степень концентрации гепатита, чтобы определиться с темпами реабилитации. Если норма гепатита С превышена на более, чем 800 тысяч МЕ/мл, она считается завышенной, при увеличении до одного миллиона – критической.

Если количественный диапазон менее 400 тысяч МЕ/мл, считается, что заражение окружающих произойдет с меньшей вероятностью. Такая цифра дает понять, что гепатит С в организме присутствует в очень маленьких дозах.

Анализ не смог определить количественное значение РНК частиц вируса, поэтому его назначают повторно несколько раз для точности диагноза.

Результаты количественного анализа

Задача определения количества вирусной нагрузки в крови пациента – это выявление степени заражения для окружающих.

Анализ на гепатит С

позволяет оценить эффективность противовирусной терапии, уровень заразности и количество инфицированных тканей.

Важно не допустить прогрессирования болезни, вовремя принять меры по профилактике, назначить правильное лечение на основе ПЦР-диагностики. Если по результатам уровень вирусной нагрузки менее 400 тысяч МЕ/мл, значит концентрация может быть минимальной, что говорит о возможном полном выздоровлении. Норма для положительного результата – это отсутствие инфекции.

Результаты анализа ПЦР:

Ответ положительный означает наличие в биологическом материале инфекции. Анализ позволяет определить точное количество инфицированных клеток. Отрицательный ответ говорит об отсутствии инфекции, которую тщательно искали в организме.

Метод количественного определения на гепатит С является точным и информативным, проводится на оборудовании с высокой чувствительностью. Расшифровка результатов анализа позволяет узнать есть ли инфекция и ее специфику, увидеть наименьшее количество инфицированных клеток на высокочувствительных анализаторах.

Ложноположительные или противоположные результаты анализ редко выдает, чаще это случается при исследованиях иммуноферментного исследования.

Рекомендуем прочитать:

Гепатит С — это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Для определения болезни используют метод ПЦР гепатита С.

Это новая высокотехнологичная методика, что позволяет исследовать генетический материал на существование жизни в мельчайших частицах (молекулах) и наименьших количествах.

Вирус гепатита очень стойкий, он способен долго жить в окружающей среде и отлично приживается в организме человека.

Что такое ПЦР?

Нынче существует огромное количество самых различных болезней. И не меньшее число методов их определения.

Так как агенты инфекций научились с легкостью приживаться в окружающей среде и эволюционировать, то чтобы их диагностировать, применяются новейшие технологии.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце. О нем часто пишут: ищет иглу в стогу сена, а потом из игл строит стог.

Виды метода ПЦР

Качественное тестирование поможет определить присутствие вируса гепатита С в организме.

Выделяют качественный и количественный анализ на гепатит. Чтобы определить, находится ли вирус в организме, и тем, у кого нашли антитела к гепатиту С, проводят качественное тестирование.

Расшифровка анализа выдает итог: «положительно»; «отрицательно». Негативное значение означает: либо человек здоров, либо агентов в крови еще недостаточно и их невозможно найти.

Поэтому стоит провести повторное исследование через некоторое время.

Положительный результат говорит о существовании инфекции. Это практически всегда точное значение. Ошибочные результаты зависят обычно от человеческого фактора (неправильное хранение или несоблюдение правил проведения методики). Когда норма, итог — отрицательный. Перед проведением тестирования особых правил нет, просто берут кровь с вены.

Ежели нашли, проводят количественный анализ (вирусная нагрузка) — он дает числовые значения: сколько РНК вируса гепатита находится на данное время в установленном объеме исследуемого материала. При активном развитии инфекции ее можно обнаружить на 1−2 неделе у зараженного человека. Обычно исследуют также кровь, потому что агенты в ней свободно циркулируют.

Особенности количественного ПЦР анализа

Количественный ПЦР поможет подобрать наиболее эффективное лечение гепатита С.

Отличием количественного анализа есть то, что не все его проходят. Качественный — определяет наличие, а количественный — помогает с подтверждением заключения «вирус гепатита», прогнозом протекания болезни и определения хода лечения. Насколько эффективна терапия, смотрят по числу РНК до и во время лечения. Также с его помощью определяют назначение доз препаратов.

Показания

Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией;качественный ПЦР нашел антитела гепатита С;нахождение острого и хронического гепатита С;существование микст-гепатитов;при планировании лечения;если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии.

Также смотрят, какая вирусная нагрузка при гепатите: низкая — терапия проводится успешно; повышенная — лечение не эффективно и его нужно менять.

Для чего проводится на различных этапах течения болезни?

Анализ поможет контролировать результаты терапии на всех стадиях лечения.

На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения. При хороших ответах на терапию срок ее сокращают. В противном случае, при медлительном уходе вируса, курс лечения продлевают. ПЦР на гепатит делают на 1,4, 12, 24 неделе терапии.

Когда показатели не падают по истечении 12 недель, то делают вывод, что терапия не подходит этому организму. Этот анализ используют для установления, насколько активна инфекция и какая вероятность ее передать. Например, при беременности есть риск заразить малыша. После терапии выявляют риск возобновления болезни.

Расшифровка

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

Цифровое обозначение числа вируса, МЕ/млОписание итога
Не обнаруженоНорма для здорового человека. Вирус не найден или исход ниже грани чувствительности методики.
До 1.8*102Обнаружено в концентрации ниже линий границы.
До 8*105Обнаружен вирус при хорошем прогнозе болезни и эффективном лечении. Низкая вирусная нагрузка.
Больше 8*105Обнаружено вирус и большая вирусная нагрузка.
Больше 2,4*107Обнаружен вирус в концентрации выше линейного диапазона.

Норма количественного анализа на гепатит С

Когда человек здоров, норма есть — «не обнаружено». У заболевших людей нормой будет снижение дозы вируса в результатах на логарифмическую единицу, что проявляется убыванием числа нулей в анализе на один (например, с 1*106 МЕ/мл до 1*105 МЕ/мл). Рамки диапазона концентрации вируса, что определяет амплификатор, находятся в границах 1,8*102 — 2,4*107 МЕ/мл. Трактовка исхода:

низкая концентрация — от 600 МЕ/мл до 3*104 МЕ/мл;средняя — от 3*104 МЕ/мл до 8*105 МЕ/мл;высокая — выше 8*105 МЕ/мл.

Отклонения

Для определения степени поражения печени назначают биопсию.

При изменениях результатов анализов вне нормы, это может свидетельствовать о возвращении болезни и размножении вируса. На получение недостоверного результата могут повлиять отдельные факторы, например, загрязнение образцов; присутствие в крови гепарина и веществ, замедляющих действие компонентов ПЦР; ошибки лабораторий; несоблюдение правил проведения теста.

Также результат в нескольких лабораториях может различаться, возможно, была другая методика проведения исследований. Чтобы узнать, насколько поражена печень и опасность болезни, недостаточно провести количественный ПЦР гепатита. Дополнительно проходят биохимические процедуры и биопсию.

Планируя лечение, проводят генотипирование вируса. В связи с тем, что гепатит С способен изменяться, существует несколько групп. Для разных типов лечение может отличаться. Бывают ситуации, когда присутствует несколько видов, но анализ находит один, тот, что преобладает. Тогда тест пересдают.

Плюсы метода

Методика ПЦР дает возможность дать заключение и назначить правильное лечение. Плюсы методики:

Быстрота результатов — не требует разграничения и выращивания видов возбудителя. Автоматизация процесса позволяет обрабатывать и изучать материал с получением результата за 4−5 часов.Прямота определения возбудителя — найдя особую часть ДНК, прямо указывает на наличие недуга.

Например, ИФА — находит белки-маркеры (продукты жизнедеятельности бактерий), что не дает точного подтверждения наличия болезни.Специфичность — исследуется вещество, характерное только для конкретного возбудителя, что исключает реакцию на ложные совместно-реагирующие агенты.

Восприимчивость — может обнаружить самое малое количество вируОписание итогаса.Универсальность — основывается на нахождении фрагментов ДНК или РНК конкретных организмов. Это дает возможность провести диагностику для любых агентов из одного биоматериала, если другие методы бессильны.

Выявляет не только явные, но и скрытые инфекции — эффективен для изучения агентов трудно выращиваемых, не выращиваемых, стойких.https://www..com/watch?v=lBi-d6jAKxQ

Посредством этого исследования провести диагностику могут каждому для удостоверения факта отсутствия болезни. Но для достоверных фактов нужно четко соблюдать инструкции. ПЦР используют в разных отраслях: криминалистике, для установления отцовства, для диагностирования различных вирусов, для выявления аллергии на лекарства, клонировании генов, мутагенезе, секвенирование ДНК.

Источник: https://gepasoft.ru/norma-pcr/

Количественная ПЦР: суть анализа и расшифровка результатов

Пцр результаты норма

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Описание

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Суть анализа

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови.

При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя.

Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами.

Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме.

При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Виды ПЦР

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

  • отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
  • положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача на ПЦР биоматериала

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

  • если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
  • нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
  • за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

Количественная оценка полученных результатов

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии.

Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С).

При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР.

Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С).

Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР).

После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые.

Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Что обнаруживается?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Особенности

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

  1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
  2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

Стоимость ПЦР-диагностики

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

Источник: https://FB.ru/article/422053/kolichestvennaya-ptsr-sut-analiza-i-rasshifrovka-rezultatov

Эффективность метода ПЦР: диагностика инфекций

Пцр результаты норма

ПЦР — диагностика инфекций, современный и высокоточный способ выявления различных инфекционных заболеваний. Чем же он отличается от других анализов?

ПЦР исследование: основные преимущества

Расшифровывается эта аббревиатура как «полимеразная цепная реакция». Ее, как гласит Википедия, изобрел в 1983 году Кэри Мюллис, американский ученый. За свое открытие он получил Нобелевскую премию.

Некоторое время ПЦР использовали лишь в научных целях, после ее успешно заимствовала медицина. Суть исследования заключается в распознавании возбудителя инфекции на уровне ДНК и РНК.

Каждый возбудитель, внедряясь в ДНК, изменяет его структуру по определенному типу. Именно по виду измененной ДНК лаборанту становится ясно, какое заболевание прячется в организме человека.

Среди остальных преимуществ ПЦР:

  1. Выявление первопричины инфекции, оставившей «следы» в ДНК. При сочетании нескольких болезней выявить то, с которого все началось, трудно. А для правильной постановки диагноза и подбора эффективного лечения, цепная реакция имеет колоссальное значение;
  2. Устанавливается на ПЦР не только измененная ДНК, но и конкретный участок трансформации. Это необходимо для исключения сомнений по поводу ложных инфекций;
  3. ПЦР-диагностика настолько чувствительна, что обнаруживает даже единичные бактерии и вирусы. Они могут оставаться в крови после неправильно назначенного лечения или незапланированного прерывания приема лекарств. Минимально диагностируемое количество при расшифровке ПЦР — 10 клеток-возбудителей. Другие методики тестирования не столь действенны;
  4. Патогенные микроорганизмы обнаруживаются даже при отсутствии выраженных симптомов ЗППП. Обнаруженное на раннем этапе такое заболевание лечится не так длительно, как запущенные его формы;
  5. Результаты ПЦР больной получает на руки довольно быстро. На диагностику инфекций уходит не более 4-6 часов. Вкупе с расшифровкой весь процесс отнимает не более 1-2 дней;
  6. Взятого единожды ДНК-материала хватает для проведения 5-6 проб. Больному не придется сдавать мазки несколько раз;
  7. ПЦР и исследование инфекций не стоит на месте, данная сфера постоянно развивается. Изобретаются новые тест-системы повышенной чувствительности, снижается стоимость проведения исследования. Если раньше оно было доступно только жителям мегаполисов, то теперь без него не мыслят определение болезни врачи стационарных поликлиник в регионах.

Особенности метода ПЦР:

  1. Точность (ошибки минимальны и частота их не превышает 0,01%);
  2. Чувствительность (тест «вычисляет» единичные бактерии в крови и мазках);
  3. Специфичность (ПЦР выявляет инфекции, часто вовсе не проявляющие себя до тяжелой стадии);
  4. Уникальность (анализы результативны в ситуациях, когда другие исследования ничего не обнаруживают).

Результаты анализа ПЦР

Как работает метод цепная реакция, как подготовиться к анализу?

Цепная реакция в лабораторных условиях предполагает многократное размножение разных участков ДНК и РНК с целью нахождения того самого нарушенного звена.

Амплифицируются (удваиваются) кислоты при помощи ферментных препаратов.

Используя ферменты, лаборант получает достаточное число копий патогенного участка ДНК для сравнения ПЦР его с образцами тех или иных болезней, спровоцированных инфекцией.

Как правило, используются биологические материалы, взятые путем забора или мазка. Для идентификации (расшифровка венерических инфекций ) на ПЦР берется мазок из влагалища, шейки матки или мочеиспускательного канала. Иногда используется также моча.

Чтобы подтвердить или опровергнуть наличие гепатита, токсоплазмоза или ВИЧ, берут кровь из вены. Кровь, забранная из пальца, часто дает ложноотрицательные результаты. Мононуклеоз диагностируют после сбора материала ил зева. Туберкулез можно выявить после сбора мокроты, которая обильно выделяется у больных в утренние часы.

Мазок из влагалища и шейки матки на ПЦР — простой анализ, пугаться которого не стоит. За 2-3 дня до его проведения нужно отказаться от половой жизни.

В течение этого же времени запрещается использовать для личной гигиены гели и мыло на щелочной основе. Подмываться можно обычной теплой водой из-под крана.

Последнее подмывание — вечером перед утренним посещением лаборатории или врачебного кабинета.

Лечение молочницы с помощью кремов, мазей, свечей или спреев, если оно проводится, тоже желательно прекратить. Мазок сдается в первые несколько суток после менструации или сразу после нее. Для получения более точных результатов рекомендуется не посещать туалет 2-3 часа перед забором мазка ПЦР.

У мужчин на цепную реакцию берут мазок из уретры. Биологический материал забирают с помощью стерильного зонда или ватного тампона, вводимого в мочеиспускательный канал.

Во время процедуры может появиться небольшой дискомфорт или чувство жжения. Мужчинам тоже придется временно отказаться от секса и средств гигиены. За неделю до анализа прекращается лечение антибиотиками и другими препаратами.

Если дискомфорт после забора сохраняется, рекомендуется скорее обратиться в поликлинику.

Допустим, в исследовании используется кровь или мазок, взятый из половых органов пациента. Генетический материал помещается в прибор-амплификатор для ПЦР, туда же добавляются ферменты.

ДНК нагревается до 90-95°С до разрушения цепочки на несколько звеньев. Этот процесс называется денатурацией.

Во время работы реактора из одного образца ДНК и РНК создаются тысячи пригодных для анализа (расшифровка реакции) результата его копий.

Результаты диагностики ПЦР

Цепная реакция показывает не только наличие инфекции, но и точное количество имеющихся возбудителей. Разработка последних лет — искусственное введение мутационных генов в ДНК человека с целью выявления предрасположенности к изменению генотипа.

Что выявляет диагностика инфекций ПЦР?

Расшифровка результатов анализа обычно просматривается отдельно лечащим врачом. Возможности цепной реакции позволяют подтвердить или опровергнуть наличие следующих болезней:

  1. Туберкулез.
  2. Хеликобактерная инфекция, часто становящаяся причиной болей в желудке без видимых на то причин.
  3. Кандидоз ротовой полости, влагалища, дыхательных путей и мочеиспускательного канала.
  4. Листериоз (гибель защитных клеток иммунной системы и разрушение нервной системы).
  5. Клещевой боррелиоз (вызывается патогенными бактериями, также именуется болезнью Лайма). Выяснить наличие болезни Лайма можно только благодаря ПЦР.
  6. Клещевой энцефалит (вирусное поражение центральной нервной системы).
  7. Папилломавирусная инфекция — распространенный вид урологической инфекции, легко передается посредством незащищенного полового акта. Выражается чаще всего в виде остроконечных кондилом или бородавок на половых органах. Опасен тем, что может поражать пищевод, прямую кишку и другие органы. Расшифровка результатов ПЦР дает возможность выявить вирус на зачаточной стадии, не сопровождающейся никакими внешними симптомами.
  8. Уреаплазмоз — болезнь, провоцируемая микроорганизмами Ureaplasma urealyticum. На протяжении многих лет она способна жить в человеческом теле, никоим образом себя не проявляя. Дает о себе знать при нарушении привычной микрофлоры.
  9. Гарднереллез. В норме бактерии-гарднереллы живут в женском организме, не являясь причиной проблем со здоровьем. Прием антибиотиков, частая смена половых партнеров, стрессы нарушают баланс влагалища. Появляется дисбактериоз, именуемый гарднереллезом.
  10. Хламидиоз — безусловный чемпион среди ЗППП. Вызывается вирусными бактериями-хламидиями. Ежегодно им заражается около 100 млн человек.
  11. Микоплазмоз. Острое заболевание, передающееся исключительно при сексе двух разнополых партнеров. Чаще до ПЦР-исследования скрывается под видом сальпингита или эндометрита.
  12. Трихомониаз — соперник хламидиоза по «популярности». Поддается лечению, при отказе от него инфекция приводит к бесплодию, патологиям при беременности, простатиту и циститу.
  13. Герпетические заболевания. Навряд ли больной ей человек вспоминает о том, что это за коварный враг, когда страдает от ангины или конъюнктивита. Разные типы герпеса поражают горло, половые органы, слизистые оболочки глаза и кожные покровы. Он маскируется под гнойную ангину, чесотку, то под обильное слезотечение, пока не будет проведено исследование.
  14. Цитомегаловирус. Бактерии, однажды оказавшись в организме, никогда не исчезнут. Они проникают в кровь больных СПИДом, перенесших операцию по трансплантации того или иного органа, принимающих препараты для подавления иммунитета. Симптомы: длительная лихорадка с высокой температурой, кожная сыпь, боли в мышцах. Все они являются показанием к проведению ПЦР.
  15. Инфекционный мононуклеоз — вирусная болезнь Филатова, проявляющаяся в высыпаниях, желчности склер и кожных покровов, белом налете на языке.
  16. Вирусные гепатиты А, В, С, G. Гепатиты легко переносятся и трудно диагностируются, если не применять методику данного анализа. Расшифровка ПЦР результатов помогает выявить проблему наружу, при этом зараженному может казаться, что у него обычный грипп, головные боли, тошнота, проблемы с печенью или селезенкой;
  17. ВИЧ-инфекция — тяжелое неизлечимое нарушение иммунитета, которое до открытия метода ПЦР невероятно трудно распознавалось. «Чума XX века» стремительно прогрессирует, если ее вовремя не выявить и не начать терапию поддерживающими препаратами.

Как ясно из этого списка, ПЦР диагностика дарит врачам многих узконаправленных специальностей неограниченные возможности. Применять метод можно в пульмонологии, вирусологии, инфекциологии, онкологии, гастроэнтерологии, гематологии, гинекологии и урологии.

ПЦР расшифровка: результаты

Анализы цепной реакции оцениваются только врачами индивидуально для каждого пациента с учетом имеющихся патологий и хронических болезней.

Результаты анализов ПЦР указывают, как уже сказано выше, на количественные характеристики патогенных бактерий. Сверяясь с ними, врач установит степень тяжести и стадию заболевания.

Исходя из этих показателей, в дальнейшем назначается дозировка препаратов и длительность курса приема.

Отрицательный результат ПЦР означает, что в забранном биологическом материале отсутствуют проявления каких-либо вирусов и инфекций. Положительный ПЦР — сигнал к тревоге. Значит, в крови и других биологических жидкостях пациента обнаружена инфекция.

Если значения минимальные, это может свидетельствовать о простом носительстве болезни, а не только об активном развитии заболевания. Простой переносчик инфекции, обнаруженный только при ПЦР, но не выказывающий никаких других симптомов, должен постоянно наблюдаться у врача.

Важно не поддаваться панике и помнить о том, что большая часть известных науке вирусов поддается лечению антибактериальными препаратами. Подбирать их и заменять один другим при неэффективности может только квалифицированный специалист, имеющий опыт в лечении той или иной болезни.

Расшифровка ПЦР может быть проведена не только по требованию врача, но и по собственному волеизъявлению. Часто его делают женщины, планирующие в ближайшее время беременность, чтобы убедиться в отсутствии венерических заболеваний. При постановке на учет в районной консультации у беременной все равно возникнет необходимость в прохождении этого типа диагностики.

Назначают ПЦР в обязательном порядке женщинам, имевшим несколько абортов или выкидышей по разным причинам. Перед ЭКО проводят анализ для устранения всех причин возможного отторжения плодного яйца.

Мужчины склонны проводить ПЦР после отпуска, во время которого имел место курортный роман или даже несколько. Диагностика помогает им не ставить под угрозу свою жизнь и здоровье потенциальных сексуальных партнерш.

Часто ПЦР становится единственным шансом для пациента избавиться от болезни на начальном этапе, когда ничтожен риск осложнений и тяжелого течения.

Источник: http://101analiz.ru/diagnostika-zabolevanij/pcr-diagnostika-infekcij.html

результаты ПЦР исследований | ВМТ

Пцр результаты норма

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является мощнейшим инстументом современной молекулярной биологии. Так как в процессе реакции амплифицируется спецефический участок ДНК, ПЦР имеет огромный потенциал для использования в современной ветеринарной практике.

Целевыми фрагментами для анализа могут быть, как и функциональные гены, так и отдельные консервативные или вариабельные локусы. Данные фрагменты называются молекулярно-генетическими маркерами.

Благодаря молекулярным маркерам стало возможно проводить селекцию животных на совершенно новом уровне, значительно сокращая время выведения новых (или улучшения существующих) пород.

Кроме того, молекулярно-генетические маркеры позволяют вести эффективный скрининг племенных животных по наследственным заболеваниям.

Вторая особенность молекулярных маркеров – возможность определения видовой принадлежности любого организма – позволяет создавать очень точные и чувствительные тест-системы для детекции возбудителей различных заболеваний (в том числе бактериальных, грибковых, протозойных и вирусных – с точностью вплоть до отдельных штаммов, патотипов или изолятов) и определять состав кормов и сельскохозяйственной продукции (по наличию ДНК организмов, из которых они были изготовлены).

Более информативной и точной модификацией «классической» ПЦР является ПЦР в реальном времени. Этот метод является количественным (или полуколичественным) – в процессе ПЦР происходит постоянное наблюдение образца датчиком, регистрирующим флуоресцентные сигналы на каждом цикле реакции.

Полученные в результате амплификационные кривые используются в дальнейшем анализе – по ним можно оценить, например, интенсивность экспрессии определенных генов (и, в следствии, проявление фенотипических признаков или наследственных заболеваний), вирусную нагрузку на организм больного животного (что позволяет выявить заболевание на ранних стадиях), оперативно (в отличие от бактериальных посевов) и точно (в отличие от ИФА) диагностировать бактериальные и протозойные заболевания.

Рассмотрим основные моменты, которые необходимо учитывать при интерпретации результатов ПЦР в реальном времени на примере исследования экспрессии генов.

Подготовка материала – выделение РНК

Принцип выделения для всех нуклеиновых кислот один и тот же – лизис биоматериала, осаждение нуклеиновых кислот на субстрат, очистка от белков, жиров, углеводов, солей и клеточного дебриса, и элюция нуклеиновых кислот в раствор.РНК является намного более лабильной молекулой, чем ДНК.

Процесс деградации рибонуклеиновых кислот происходит на порядок быстрее.

Этому способствует, во первых, их одноцепочечная структура, во вторых – большое количество РНКаз (ферментов, расщепляющих РНК), которые присутствуют как и в самих клетках, из которых производят выделение, так и на поверхности кожи оператора (и всех предметов и оборудования, с которыми он контактировал).

Тем более, во многих протоколах выделения ДНК применяется дополнительная обработка образца РНКазами – появляется еще один источник контаминации рабочего места.

Рассмотрев эти особенности, можно выделить ряд обязательных для соблюдения правил подготовки образцов РНК:

  • Для уменьшения деградации от эндогенных РНКаз забор биоматериала должен быть проведен непосредственно перед выделением, биоматериал должен быть заморожен в жидком азоте. (Для
    разных наборов реактивов условия могут быть разными. Более подробные рекомендации описаны в протоколах выделения.)
  • Работать исключительно в перчатках и масках. Перчатки, посуду, оборудование и все рабочие поверхности следует обработать деактиватором РНКаз (чаще всего раствором ДЕПК).
  • Использовать воду, свободную от РНКаз (RNAse free).
  • Не допускать хранения образцов РНК и реактивов для их выделения рядом с растворами РНКаз.

Что можно измерить с помощью ПЦР в реальном времени?

Если вам необходимо проанализировать экспрессию генов, ПЦР в реальном времени может показать количество мРНК в образцах. В результате реакции амплифицируется небольшой регион мРНК, с помощью олигонуклеотидов и флуоресцентного зонда (как в методике TaqMan).

Амплификатор (прибор, в котором происходит ПЦР) измеряет интенсивность флуоресценции зондов в образцах на протяжении каждого цикла. На первых циклах уровень флуоресценции недостаточен, чтобы его мог детектировать прибор, но при дальнейшем прохождении реакции он возрастает многократно.

Кривая амплификации имеет так называемую экспоненциальную фазу, после которой следует фаза плато.

Ct (пороговый цикл) обозначает определенный цикл реакции и представляет собой одно из ключевых значений ПЦР в реальном времени. Пороговый цикл наступает, когда график кривой амплификации переходит в экспоненциальную фазу (на этой фазе отрезок кривой амплификации линейный).

Порог (порог чувствительности, пороговое значение), который обозначен на рисунке красной прямой, пересекает кривую амплификации в точке наступления экспоненциальной фазы.

Порог чуствительности может быть разным для разных видов анализа (если, например, используются разные методики анализа или исследуются разные гены), но всегда одинаковый для всех образцов в одной выборке (или в одном эксперименте).

Суть ПЦР в реальном времени заключается в том, что в каждом цикле реакции количество продукта удваиватся по сравнению с предыдущим. Если, например, значение Ct для двух реакций отличается на 2 цикла (см. рисунок), можно сделать вывод, что в образце А (обозначен фиолетовым графиком) в 4 раза больше копий мРНК, чем в образце Б (обозначен оранжевым графиком).

Чаще всего, данные, полученные в результате ПЦР в реальном времени, позволяют оценить так называемую «относительную экспрессию», то есть, насколько различается интенсивность экспрессии определенного гена у двух организмов. Однако, методика позволяет оценить и абсолютное значение экспрессии генов, но для этого необходимо создать стандарт, в роли которого обычно выступают  клонированные целевые участки кДНК, интегрированные в вектор.

Словарь терминов:

Внутренний контроль (внутренний контрольный образец, ВКО). Контрольный ген, который присутствует во всех образцах в выборке.
Например, GAPDH, ACTB, TBP, HPRT, PPIA, YWHAZ.

Калибровочный образец. Калибровочным называют образец, по которому ведется сравнение полученных данных. Он представляет собой точку отсчета (time-zero). Значение RQ для контрольного образца равно 1, так как в таком случае он сравнивается с самим собой.

Ct = Пороговый цикл. Обычно ПЦР в реальном времени проходит в течение 40 циклов. Пороговый цикл наступает тогда, когда кривая амплификации пересекает линию порога чувствительности прибора (в месте, где график кривой амплификации становится линейным). Это значение необходимо для анализа.

Чем выше значение порогового цикла (Ct=30-35), тем меньше мРНК находится в образце, так как нужно больше времени для амплификации необходимого для интенсивной флуоресценции количества копий мРНК. Если значение Ct невелико (10-15), это свидетельствует о том, что ген экспрессируется очень активно.

Обычно внутренний контрольный образец имеет меньшее значение Ct, чем исследуемые гены.

Дельта Ct = Ct исследуемого гена – Ct внутреннего контрольного образца

Дельта Дельта Ct = ΔCt образца 1 – ΔCt калибровочного образца

Дельта Ct SD = Стандартное отклонение. Стандартное отклонение рассчитывается программным обеспечением по обработке данных анализа на основании значений Ct в трехкратном повторении. Данные достоверны, если Стд. откл. меньше 0,25. Если Стд. откл. Более 0,25, значению RQ доверять нельзя.

Реплики. Повторения (так называемые реплики) можно разделить на технические и биологические. Технической репликой является амплификация одного и того же материала, биологические реплики предполагают выделение мРНК и амплификацию из разного биологического материала.

RQ = Относительное количество = 2 – ΔΔCt. Значение RQ показывает количество продукта амплификации в технических репликах относительно калибровочного образца. Все образцы в рамках эксперимента будут сравниваться с калибровочным.

Например, если RQ=10, это значит, что в исследуемом образце экспрессия проходит в 10 раз более активно, чем в калибровочном. Значение RQ=0,1 говорит о том, что в исследуемом образце экспрессия проходит в 10 раз менее активно, чем в калибровочном.

Достоверными могут считаться данные, если RQ больше 2 или меньше 0,5. Это зависит от особенностей методики. Не исключено, что для одного и того же образца в один день можно получить значение RQ=0,8, а на следующий – 1,2.

Если в ваших образцах предполагается малый разброс RQ (отличие в 1,5 раза от каибровочного образца), для анализа следует сделать биологические реплики образцов и они должны быть очень хорошо очищены.

Кроме того, для каждого гена необходимо провести по 2 анализа и использовать ПКО с известным RQ.

RQmin и RQmax = диапазон возможных значений RQ с учетом стандартного отклонения ΔCt. Доверительный интервал должен быть 95%.
Если вам необходимо узнать действительную ошибку RQ, следует делать трехкратные биологические реплики. Это позволит выполнить тест Стьюдента для различных групп повторений.

Общее качество данных

При анализе полученных данных удостоверьтесь, что кривые амплификации не имеют резких пиков и параллельны друг другу. Технические реплики должны быть просканированы в пределах 0,5 цикла. Значения Ct должны быть

Источник: https://vmtechnology.ru/interpretation-pcr-results/

Все о лечении
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: